三萜类定量分析方法的研究已有很多报道,利用香草醛-高氯酸与三萜类化合物反应生成有色化合物的原理,你的实验可选择香草醛-高氯酸显色反应建立了植物甾醇中总三萜的分光光度测定方法。由于齐墩果酸和甾醇均为三萜类化合物,显色后的光吸收波谱相似,很大吸收波长相近,故选择齐墩果酸作为对照品。首先对香草醛-高氯酸试剂的显色效果进行了探讨,然后采用正交实验确定显色反应的很佳测定条件,并对样品中三萜类化合物总量进行测定与分析。

实验方法

对照品标准溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品20·0mg,置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,即得齐墩果酸标准溶液,备用。

供试样品的制备 以大豆油为原料,采用氢氧化钾-乙醇回流皂化法提取大豆油不皂化物,经多次结晶后得到大豆植物甾醇。9g氢氧化钾溶于100mL 95%的乙醇中,加入大豆油30g,在氮气保护下加热回流5h后,回收大约一半体积的乙醇,并趁

热将溶液倒入500mL蒸馏水中,溶液为红棕色。冷却至室温后,用乙醚萃取皂化液3~4次,至乙醚层无色为止,合并乙醚提取液,分别用蒸馏水、5%氢氧化钾溶液(10mL/1g油)洗涤一次,再用蒸馏水洗至中性,用无水硫酸钠干燥,除去乙醚得到橙红色蜡状半固体物质,即为大豆油的不皂化物,供进一步分离分析。采取甲醇经多步结晶法,从大豆不皂化物中分离得到植物甾醇,纯度为95%。精确称取植物甾醇20mg,于100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度线,得到植物甾醇供试样品溶液,备用。

分析方法 精密吸取适量植物甾醇供试样品溶液或齐墩果酸对照品溶液于5mL容量瓶中,加热挥发全部溶剂后,加入一定量新配制的5%香草醛-冰乙酸溶液及一定量的高氯酸溶液,摇匀,在一定温度下,恒温水浴反应一定时间后,于流水冷至室温,加入乙酸乙酯使总量为5mL,摇匀,同时做试剂空白,在很大吸收波长下测定体系的吸光度

结果与分析

测定波长的选择

取齐墩果酸对照品溶液和供试样品溶液0·4mL,置于5mL容量瓶中,加热将溶剂全部挥发干,加入新配制的5%香草醛-冰乙酸液0·2mL及高氯酸1·2mL,在70℃恒温水浴中加热15min,流水冷至室温,加入乙酸乙酯定容为5mL,摇匀,用乙酸乙酯稀

释至5mL的混合溶液为空白对照,经显色后,在450~700nm范围内进行全波长光谱扫描。结果表明,对照品溶液与供试样品溶液在575nm处均有很大吸收峰,多次重复,峰形一致,故可选择575nm作为样品测定的波长,

酸体系的选择

采用分光光度计比色法测定三萜类化合物,很常用的体系有香草醛-高氯酸体系和香草醛-硫酸体系。按照方法,分别采用高氯酸及硫酸-香草醛体系,以水为参比溶液,使用高氯酸体系的空白为空白1,使用硫酸体系的空白为空白2,每隔10min测

定吸光度。

由表（正态分布曲线）结果可以看出,香草醛-硫酸体系的显色较深,但随放置时间延长,吸光度也增大,稳定性差。并且,硫酸体系的试剂空白值较高,而香草醛-高氯酸显色柔和且时间对显色影响不大,因此,实验选择香草醛-高氯酸体系

正交实验设计及结果

实验选择显色剂用量、加热时间、加热温度、高氯酸用量作为四个考察因素,设定三个水平,根据因素水平表,选择正交表L9(34)进行实验,以吸光度为实验指标,吸光度越大,说明显色效果越好

（植物甾醇中三萜类化合物的含量测定）CNKI搜下这篇文章吧

植物甾醇酯一般由植物甾醇与脂肪酸通过酯化反应或转酯化反应制得。由于可以用于制造植物甾醇酯的甾醇和脂肪酸种类都较多，因此可以得到多种不同理化性质的植物甾醇酯，三种主要植物甾醇酯为β－谷甾醇酯，豆甾醇酯，菜油甾醇酯。甾醇酯能够在人体内转化成甾醇和脂肪酸，其生理功能包括植物甾醇和脂肪酸两部分所具有的生理功能，具有与游离植物甾醇同等的减低血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的效果，在某些方面甚至效果更好。

以晶体形式存在的植物甾醇在应用中存在以下两方面的问题，一方面结晶形式在人体内的溶解性和生物可利用性比较差，因此导致治疗高脂血症时的高剂量以及由此引发的高植物甾醇血症，即血清中的植物甾醇浓度明显升高。另一方面，植物甾醇在油中的溶解度很小，给应用于食品中带来困难。

植物甾醇具有显著的降血脂功能，这一点己被大量研究证实。但是，植物甾醇不溶于水，在油相中的溶解度也相当有限，这一缺点限制了它的应用。多年来，人们一直试图将植物甾醇改性，以拓展其应用范围。通过纯化、改性己开发出植物甾醇产品多种。其中将植物甾醇酯化为甾醇酯是很重要的改性手段之一。酯化产物甾醇酯作为降血脂功能因子可广泛应用于人造奶油、涂抹油和冰淇淋等产品中，同时可减少乳化剂的使用。

如何从油中提取甾醇

公开(公告)号

CN1724555A

公开(公告)日

2006.01.25

申请(专利)号

CN200510050601.4

申请日期

2005.07.06

专利名称

从菜籽油脚中提纯β-谷甾醇的方法

主分类号

C07J9/00(2006.01)I

分类号

C07J9/00(2006.01)I

分案原申请号

优先权

申请(专利权)人

浙江大学

发明(设计)人

龚兴国;张 锐;郦剑勇

地址

310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号

颁证日

国际申请

进入*日期

专利代理机构

杭州中成专利事务所有限公司

代理人

唐银益

国省代码

浙江;33

主权项

一种从菜籽油脚中提纯β-谷甾醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将菜籽油脚与浓度15～20％的NaOH溶液按m/V＝1∶2混合，在60～70℃下回流皂化1.5～2.5个小时；(2)过滤去除皂化产物，将滤液在50～60℃下减压浓缩到原体积的1/10；(3)在滤液中加入等体积乙酸乙酯萃取滤液2～3次，将萃取液合并，用等体积的水洗2～3次至中性；(4)向浓缩液中加入一定量的干燥Na2SO4粉末，常温下搅拌，去除乙酸乙酯浓缩液液中多余的水分；(5)过滤浓缩液，在减压条件下蒸干滤液，剩下黄色粉末常温下自然风干，即为β-谷甾醇粗品。(6)将β-谷甾醇粗品与结晶液(环己酮∶正丁醇V/V＝3∶1)按质量比1∶4混合，在50～60℃条件下加热搅拌，让β-谷甾醇粗品充分溶解；(7)保温50～60℃下过滤去除不溶杂质，滤液于室温下静置结晶6～7个小时后，过滤干燥得到β-谷甾醇白色针状晶体；(8)将上步得到的β-谷甾醇与环己酮按质量比1∶4混合，在60～70℃条件下搅拌加热，让β-谷甾醇粗品充分溶解；(9)保温60～70℃下过滤去除不溶杂质，滤液于室温下静置结晶6～7个小时后过滤干燥，得到β-谷甾醇白色针状晶体；(10)将上步得到的β-谷甾醇按(8)和(9)操作，用环己酮重结晶1次，制得β-谷甾醇白色针状晶体；(11)用在0℃下预冷后的无水乙醇冲洗上步得到的β-谷甾醇，去除残留有机溶剂后置于室温下自然风干，得到很终产品。

摘要

本发明公开了一种生物活性物质植物甾醇的分离纯化方法，特别涉及从菜籽油下脚料中快速批量提取高纯度β-谷甾醇的方法。包括将菜籽油脚皂化、减压浓缩用乙酸乙酯萃取、干燥、减压蒸干以环己酮∶正丁醇结晶液和环己酮分步结晶等步骤。具有分离速度快、分离成本低、得率高和原料丰富易得等优势。且该方法充分利用制取菜籽油后剩下的油脚废料，成本低，得率高，并且生产的产品纯度高(纯度＞98％，熔点为140～141℃)、晶体形态好(白色针状晶体)，适宜作为β-谷甾醇标准品及医药原料使用。

植物甾醇不溶于水、碱和酸，常温下微溶于丙酮和【乙醇】，溶解

于乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳、石油醚

植物甾醇植物甾醇通常以多种形式存在，是一种类

似于环状醇结构的物质，广泛分布于自然界，代表

了植物代谢的一个终产物。植物的根、茎、叶、果

实和种子中均含有，但主要存在于植物种子中，以

游离型、脂肪酸酯和糖苷等形式存在。经溶剂结晶获得的植物甾醇通常为针状或鳞片

状白色结晶，其商品则多为粉末状或片状。

植物甾醇一般指植物固醇。

植物固醇，是以游离状态或与脂肪酸和糖等结合的状态存在的一种功能性成分，广泛存在于蔬菜、水果等各种植物的细胞膜中。

植物固醇分为4-无甲基甾醇、4-甲基甾醇和4,4’-二甲基甾醇三类，4-无甲基甾醇主要有Β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇等。植物固醇的结构与动物性甾醇的结构基本相似，不同之处是c-4位所连甲基数目及c-11位侧链的差异，正是这些侧链上的微小不同致使其具有不同生理功能。

物理特性：

植物固醇的相对密度略大于水，不溶于水、酸和碱，可溶于多种有机溶剂，如溶解于乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳和石油醚。植物固醇的物理化学性质主要表现为疏水性，但因其结构上带有羟基，故又具有亲水性，所以植物困醇具有乳化性。

经溶剂结晶获得的植物固醇通常为针状白色结晶，其商品则多为粉末状或片状。植物固醇的相对分子质量约为386～456Da，熔点较高，都超过100℃，很高达215℃。

以上内容参考：百度百科-植物甾醇

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